英国365体育
当前位置:主页 > 英国365体育 >

琼脂糖凝胶电泳实验

时间:2019-05-15 12:46  来源:admin   作者:365bet首页   点击:
首先,准备1试剂?
5×TBE缓冲液:450mmol / LTris-硼酸,10mmol / LEDTA,pH8。
0
在使用时将先前的储备溶液稀释10倍至0。
5x TBE缓冲液可用作电泳和凝胶化的缓冲液。
二,粘合剂1?
对于根明胶和凝胶浓度,将重琼脂糖粉末加入到含有固定量工作缓冲液的烧瓶中(液体总量不应超过玉米体积的50%)。
2?
用包装纸或牛皮纸覆盖锥形瓶口,在薄膜或纸上做一些小孔,加热使琼脂糖溶解在微波炉中。
加热时,溶液沸腾时,戴上耐热手套,小心摇动锥体,使琼脂糖完全溶解。
重复此过程数次,直至琼脂糖完全溶解。
3?
将溶液冷却至约50℃至约60℃。如果需要,此时可加入乙基溴溶液(最终浓度为0)。
5?
加入1μg/ ml或1μl/ 30 mL的DNA绿色染料并充分混合。
4?
将琼脂糖溶液倒入模具中并将梳子插入到位。
凝胶的厚度通常为3-5毫米。
如下图所示,将小胶水倒入约25-30毫升琼脂糖溶液中,大胶水约为60-70毫升。如果需要回收,凝胶会适当增稠。
5?
将凝胶在室温下放置约30分钟至1小时。
三,加载一个?
将适当量的样品与6x上样缓冲液(例如:1μl样品和5μl6×上样)混合,并用微量移液管小心地加入样品孔中。
2?
可以根据样品的浓度调节样品的电荷。如果DNA的量很小,您可以按上述比例增加样品量,但要确保总体积不超过样品罐的体积(通常为40μl是上限)。大孔的上限为200μl。相关电影规格)?
3?
每次添加后更换每个样品的尖端以避免污染。小心处理样品,以免损坏或刺穿样品池底部的凝胶。
四,电泳1?
添加完成后,关闭电泳槽盖并立即将其打开。
控制电压保持在110V,电流大于40mA。
2?
当条带从凝胶前部移动约2cm(约40分钟)时,停止电泳。
3?
拍照并在紫外线下观察。